小鼠特异性免疫球蛋白E(sIgE)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
使用目的：
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中特异性免疫球蛋白E(sIgE)的含量。
实验原理
本试剂盒应用间接法测定标本中小鼠特异性免疫球蛋白E(sIgE)水平。用纯化的小鼠特异性免疫球蛋白E(sIgE)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的特异性免疫球蛋白E(sIgE)标准品和未知浓度的特异性免疫球蛋白E(sIgE)待检样品，温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过**洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成**终的黄色。颜色的深浅和样品中的特异性免疫球蛋白E(sIgE)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠特异性免疫球蛋白E(sIgE)浓度。
试剂盒组成
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1
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30倍浓缩洗涤液
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20ml×1瓶
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8
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标准品S1（60ng/ml）
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0.5ml×1瓶
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2
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链霉亲和素-HRP
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6ml×1瓶
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标准品S2（40 ng/ml）
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0.5ml×1瓶
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3
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酶标包被板
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12孔×8条
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标准品S3（20 ng/ml）
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0.5ml×1瓶
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4
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生物素标记的抗-IgG抗体
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6ml×1瓶
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标准品S4（10 ng/ml）
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0.5ml×1瓶
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5
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显色剂A液
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6ml×1瓶
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标准品S5（5 ng/ml）
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0.5ml×1瓶
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6
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显色剂B液
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6ml×1/瓶
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9
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说明书
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1份
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7
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终止液
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6ml×1瓶
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10
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封板膜
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2张
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标本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
操作步骤
1、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl，在样本反应孔中加入50微升样本，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。
3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复4次，拍干。
5、加生物素标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟
6、洗涤：操作同4。
7、加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
8、洗涤：操作同4。
9、显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，**使用排枪加样。
4． 如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先将样本稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请**后乘以稀释倍数（×5×n）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
线形范围：
2ng/ml -70 ng/ml
规格：
96人份/盒
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月